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三線鐮刀菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒

  • 更新時間:  2020-05-29
  • 產(chǎn)品型號:  50T
  • 簡單描述
  • 三線鐮刀菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒所謂實時熒光定量PCR技術(shù),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
詳細介紹

產(chǎn)品名稱

三線鐮刀菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒

英文名稱

Fusarium tricinctum

貨號

CP934266

儲存條件:

14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

探針法:

三線鐮刀菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒aqMan 探針是一種寡核苷酸探針,它的熒光與目的序列的擴增相關(guān)。它與目標序列上游引物和下游引物之間的序列配對。熒光基團連接在探針的5’ 末端,而淬滅劑則在3’ 末端。當完整的探針與目標序列配對時,熒光基團發(fā)射的熒光因與3’ 端的淬滅劑接近而被淬滅。但在進行延伸反應(yīng)時,聚合酶的5’ 外切酶活性將探針進行酶切,使得熒光基團與淬滅劑分離。隨著擴增循環(huán)數(shù)的增加,釋放出來的熒光基團不斷積累。因此熒光強度與擴增產(chǎn)物的數(shù)量呈正比關(guān)系。相對于染料法,Taqman探針法具有更高的特異性和準確性。
使用方法:
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細菌樣品DNA。注意:DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA,后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備O157:H7標準曲線(以10-10E6這6個10倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DN段作為陽性對照。
1. 標記6個離心管,分別為6,5,4,3,2和1號。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至10E7拷貝/μL,建議每次稀釋10倍,梯度稀釋至10E7拷貝/μL)。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得10E6拷貝/μL的陽性對照。
5. 換槍頭,從6號管中取5 μL溶液到5號管中,充分震蕩1分鐘,得10E5拷貝/μL的陽性對照。
6. 換槍頭,從5號管中取5 μL溶液到4號管中,重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。
7. NC管中不加任何陽性對照。
8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進行定量PCR(見下步),每個樣品做3次重復。PCR后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標準曲線。
探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖:

應(yīng)用案例:
樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝(一管式病毒 DNAout 的成分)。
稀釋陽性對照(以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DN段作為陽性對照。
2.標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。5.換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6.換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7.換槍頭,在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中,得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
8.重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20  μL 體系,在樣品制備室進行)
9.在 PCR 管中加入下列成分。
以下是公司正在銷售的產(chǎn)品:

(S)-5-氧代四呋喃-3-氨基酸芐酯通用型酰膽酯酶活性化學發(fā)光法定量檢測試盒

2-氨基-3,5-二吡嗪細胞酰膽酯酶活性化學發(fā)光法定量檢測試盒

3-羥基苯腈組織酰膽酯酶活性化學發(fā)光法定量檢測試盒

4-芐醇血液酰膽酯酶活性化學發(fā)光法定量檢測試盒

1,3-二基脲嘧啶體液酰膽酯酶活性化學發(fā)光法定量檢測試盒

4--2-硝基苯胺苯酰酰膽酯酶活性化學發(fā)光法定量檢測試盒

5--1H-吡唑[3,4-B]吡啶銅藍蛋白活性比色法定量檢測試盒

三線鐮刀菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒4-羥基-3-基苯酮血液α-淀粉酶活性CNPG3比色法定量檢測試盒

5-吲哚-3-體液α-淀粉酶活性CNPG3比色法定量檢測試盒

(S)-1-(2,6-二-3-氟苯基)醇總膽汁酸(TBA)定量檢測試盒

3-吲哚酰胺血清/血漿總膽汁酸酶偶聯(lián)反應(yīng)比色法定量檢測試盒

2-羥基-2-基-1-苯基-1-酮組織總膽汁酸酶偶聯(lián)反應(yīng)比色法定量檢測試盒

2-硝基咪唑體液總膽汁酸酶偶聯(lián)反應(yīng)比色法定量檢測試盒

3-噻吩酸血清/血漿總膽汁酸酶循環(huán)比色法定量檢測試盒

3,5-二-4-氨基三氟氧基苯組織總膽汁酸酶循環(huán)比色法定量檢測試盒碘酸Iodoacetic Acid -20℃保存5g

碘硝基四唑紫嘌呤INT(Iodonitrotetrazolium Chloride)4℃避光保存250mg

碘化啶干粉PI Powder-20℃干燥避光保存10mg

碘化啶苯Propidium Iodide4℃保存10mg

碘代酰胺Iodoacetamide4℃保存5g

地塞米松溶液,50mg/mLDexamethasone DXM Solution-20℃避光保存1mL

地塞米松Dexamethasone4℃保存100mg

標記dUTP溶液 (0.35mM)DIG-11-dUTP-20℃保存25uL

低載量PCR片段純化試盒Mini PCR Clean-Up Kit常溫保存50次

低載量PCR片段純化試盒Mini PCR Clean-Up Kit常溫保存100次

注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學;8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。


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