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小鼠源性成分探針法熒光定量PCR檢測試劑盒準(zhǔn)備試劑與收集血樣

瀏覽次數(shù):1185發(fā)布日期:2021-07-27

小鼠源性成分探針法熒光定量PCR檢測試劑盒準(zhǔn)備試劑與收集血樣:

雙重核酸試劑盒(熒光PCR法) 1.  收集標(biāo)本:血清、血漿(EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝)、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測, 2-8 ℃ 保存48 小時(shí);更長時(shí)間須冷凍( -20   ℃或 -70   ℃ )保存,避免反復(fù)凍融。

2.  標(biāo)準(zhǔn)品液配制:使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻,配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設(shè)標(biāo)準(zhǔn) 管 8 管,管加標(biāo)本稀釋液 900ul ,第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ,移至第二管 。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋,從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對(duì)照。

3.  10× 標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋( 示例: 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水)。

4.  洗滌液:用重蒸水 1:20 稀釋(示例:1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水)

檢測程序:

1.  加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品 100ul ,將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2.  洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次,向?yàn)V紙上印干。

3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4.  洗板:同前。

5.  每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

6.  洗板:同前。

7.  每孔加入底物工作液100ul ,置 37   ℃ 暗處反應(yīng)15 分鐘。

8.  每孔加入100ul 終止液混勻。

9.  30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在 45 0 nm 處測 吸光值。

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