豬腦鈉素ELISA試劑盒的操作要領(lǐng)
瀏覽次數(shù):65發(fā)布日期:2025-02-12
豬腦鈉素(BNP)是一種由心臟分泌的利鈉肽,在心血管疾病的診斷和治療中具有重要意義,
豬腦鈉素ELISA試劑盒采用雙抗原夾心法測定標本中豬腦鈉素/腦鈉尿肽(BNP)水平。用純化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,可與樣品中豬腦鈉素/腦鈉尿肽(BNP)相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標記的抗原結(jié)合,形成抗原-抗體-酶標抗原復合物,經(jīng)過洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成黃色。顏色的深淺和樣品中的豬腦鈉素/腦鈉尿肽(BNP)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過校準曲線計算樣本中豬腦鈉素/腦鈉尿肽(BNP)濃度。
豬腦鈉素ELISA試劑盒的操作步驟:
1.加樣:標準品設定5個濃度點,每個濃度設定平行孔,加入50μl不同濃度的標準品;空白孔設定1個孔,加入50μl蒸餾水作為空白對照孔;待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl,使樣品稀釋度為5倍。
2.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
3.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
4.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
5.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
6.溫育:操作同2。
7.洗滌:操作同4。
8.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘。
9.終止:每孔加終止液50μl,終止反應,此時藍色立轉(zhuǎn)黃色。
10.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值),測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。