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組織腎素(renin)定量檢測試劑盒操作程序

瀏覽次數(shù):1115發(fā)布日期:2023-01-05

組織腎素(renin)定量檢測試劑盒操作程序:

1.已稀釋好的ABC和TMB顯色液在加入酶標板孔前都應(yīng)預先在37℃中平衡至少30分鐘。試劑或樣品稀釋時,切不可忘記混勻。每次檢測都應(yīng)該做標準曲線。用戶須估計樣品待測因子的含量,決定適當?shù)南♂尡稊?shù)。

確定本次檢測所需的已包被抗體的酶標板孔數(shù)目,并增加1孔作為TMB空白顯色孔??倲?shù)=樣品數(shù)+9;做雙份檢測時×2。其余重包裝好放入冰箱中。

2.將2000pg/ml,1000pg/ml,500pg/ml,250pg/ml,125pg/ml,62.5pg/ml,31.2pg/ml的標準品各100μL依次加入一排7孔中,1孔只加樣品稀釋液的作為零孔。對于人血清、血漿、尿液、細胞裂解液或細胞培養(yǎng)上清,直接加已用樣品稀釋液稀釋的樣品100μL。

3.酶標板加上封板膜,37℃反應(yīng)90分鐘。

4.反應(yīng)后用自動洗板機吸去酶標板內(nèi)的液體;或甩去酶標板內(nèi)液體,再對著吸水紙拍幾下。不洗。

5.將準備好的生物素抗人renin抗體工作液按每孔100μL依次加入(TMB空白顯色孔除外)。

6.酶標板加上封板膜,37℃反應(yīng)60分鐘。

7.1X洗滌緩沖液洗滌3次,每次浸泡1分鐘左右(每孔洗液至少300μL)。

8.將準備好的ABC工作液按每孔100μL依次加入(TMB空白顯色孔除外)。

9.酶標板加上封板膜,37℃反應(yīng)30分鐘。

10.1X洗滌緩沖液洗滌5次,每次浸泡1~2分鐘左右(每孔洗液至少300μL)。

11.按每孔90μL依次加入已在37℃平衡30分鐘的TMB顯色液,37℃避光反應(yīng)25~30分鐘。

12.注意:顯色時間供參考,因用戶實驗室條件差異,最佳顯色時間會有所不同。此時肉眼可見標準品的前3~4孔有明顯的梯度藍色,后3~4孔差別不明顯。

13.按每孔100μL依次加入終止液,此時藍色立轉(zhuǎn)黃色。

14.用酶標儀在450nm測定O.D.值。

15.有兩種設(shè)定空白對照的方案:

① 將TMB空白顯色孔(只加TMB顯色液和終止液)設(shè)為對照。所有的標準品和樣品的吸光值減去TMB空白顯色孔的吸光值后,在坐標紙上畫出曲線,以吸光值作為縱坐標,以濃度作為橫坐標。

② 將零孔設(shè)為對照。所有的標準品和樣品的吸光值減去零孔的吸光值后,得到的數(shù)據(jù)可以直接在坐標紙上畫出曲線。

根據(jù)樣品的吸光值在坐標上找出對應(yīng)的濃度。用戶也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了N倍,其實際濃度應(yīng)該×N。

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