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RT-PCR試劑盒使用注意事項

瀏覽次數(shù):1164發(fā)布日期:2021-12-13
  RT-PCR試劑盒逆轉(zhuǎn)錄和PCR在同一反應體系中進行,反應過程中無需添加試劑,無需打開管蓋,在避免污染的同時提高了檢測靈敏度和實驗效率。本試劑盒包括全新高效逆轉(zhuǎn)錄酶、快速熱啟動DNA聚合酶,同時包含適用于逆轉(zhuǎn)錄和PCR擴增的反應緩沖液和實驗中所需的反應組分。經(jīng)過重組表達的SuperRT逆轉(zhuǎn)錄酶RNaseH活性缺失,減少了逆轉(zhuǎn)錄反應中RNA的降解,更容易獲得全長的cDNA。
  該逆轉(zhuǎn)酶逆轉(zhuǎn)錄效率高,可對少量RNA模板進行良好的逆轉(zhuǎn)錄反應。SuperRT逆轉(zhuǎn)錄酶與RNA親合性高,能通讀GC含量高,二級結(jié)構復雜的RNA模板,獲得高產(chǎn)量的cDNA。PCR反應使用的DNA聚合酶具有擴增效率高、延伸速度快的優(yōu)良性能。*的緩沖體系使逆轉(zhuǎn)錄酶和聚合酶同時發(fā)揮功效。使用該試劑盒能夠方便快捷的在同一個反應管內(nèi)完成逆轉(zhuǎn)錄和PCR擴增反應。使用本試劑盒擴增得到的目的產(chǎn)物3′端附有一個″A″堿基,可直接用于T/A克隆。
  RT-PCR試劑盒注意事項:
  1.用于cDNA合成反應的溶液試劑盡量可能用DEPC進行處理,并在高壓滅菌后使用。有些試劑不能高壓滅菌時,首先用經(jīng)過滅菌的器具、水等配制溶液后,再將溶液進行過濾除菌處理。
  2.RNA樣品要避免基因組DNA污染。
  3.避免多次反復凍融RNA,使RNA保持在冰浴中處融化狀態(tài)。
  4.試劑盒的各組成成分應在-20℃保存。
  5.cDNA產(chǎn)物應置于-20℃保存。
  RT-PCR試劑盒合理配備了與cDNA鏈合成反應相關的各種組分,該試劑盒中的TIANScriptM-MLV具有高效的逆轉(zhuǎn)錄酶活性,對后續(xù)的PCR或定量PCR實驗兼容性好,適合于各種PCR耐熱聚合酶。
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