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實(shí)時(shí)熒光PCR試劑盒使用注意事項(xiàng)

瀏覽次數(shù):743發(fā)布日期:2021-10-08
  實(shí)時(shí)熒光PCR試劑盒該染料與雙鏈DNA結(jié)合后,能夠產(chǎn)生強(qiáng)度高于SYBR Greenl的熒光。結(jié)合了以下諸多優(yōu)勢:熱啟動(dòng)酶、優(yōu)化的緩沖液、*熒光染料,可有效地提高mRNA表達(dá)水平檢測的可靠性、重復(fù)性和靈敏度。qPCRmix為即用型的2x預(yù)混母液,該混合母液經(jīng)過處理,穩(wěn)定性高,主要包含:雙鏈DNA結(jié)合染料、熱啟動(dòng)酶、MgCl2、dNTPs、反應(yīng)緩沖液,可確保產(chǎn)生實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果。
  實(shí)時(shí)熒光PCR試劑盒使用注意事項(xiàng):
  1.保存
  未拆封的試劑盒,請于-20℃保存;拆封之后,應(yīng)在4℃保存。在試劑消耗量較少的實(shí)驗(yàn)室,可以考慮將試劑盒的按照組分單獨(dú)分裝,后保存在-20℃。
  2.配置
  試劑盒內(nèi)所含各組份都是混合物,在靜置情況下會(huì)發(fā)生分層現(xiàn)象,因此,試劑盒現(xiàn)配現(xiàn)用,震蕩混勻,避免反復(fù)凍融,避免預(yù)混。其中,反復(fù)凍融將大幅縮短試劑盒使用壽命。在擴(kuò)增體系的選擇時(shí),盡量選擇標(biāo)準(zhǔn)體系,再根據(jù)檢材情況加入模板,之后切勿忘記以PCR用水補(bǔ)足擴(kuò)增體系。
  3.切勿預(yù)混因試劑盒中酶的活性較高,將各組份按照比例混合之后,即使沒有達(dá)到它的合適溫度,但也可能發(fā)生與引物結(jié)合,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)丟位點(diǎn)或者雜合子純化等情況。
  4.陰陽性參照
  實(shí)驗(yàn)結(jié)果會(huì)受提取、擴(kuò)增和電泳等多個(gè)環(huán)節(jié)的影響,因此,每次擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)都應(yīng)該添加一組陰陽性參照。這樣,當(dāng)結(jié)果異常的時(shí),我們就可以結(jié)合陰陽性參照的表現(xiàn),排查問題出在哪個(gè)環(huán)節(jié)。
  實(shí)時(shí)熒光PCR試劑盒特點(diǎn):
  1.高靈敏度:可定量檢測低拷貝靶基因。
  2.穩(wěn)定性增強(qiáng)。
  3.靈敏度更高,Ct值更小,對PCR反應(yīng)具有更小的抑制作用。
  4.熱啟動(dòng)酶性能強(qiáng)勁、可靠。
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